澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

TS209; 为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于 1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析.结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)6.18 mg/mL与还原能力IC50 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC50 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC50 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有 46个肽段,肽段长度均小于 10个氨基酸,匹配得分大于 200分的 9条肽段分子量为 631～920 Da,均无毒性;筛选获得高抗氧化活性肽HLLPK、KEFFP、KEFFPA,其分子量分别为 606.84、666.83、737.92 Da.本研究初步揭示了澳洲坚果抗氧化肽组成,深化了澳洲坚果抗氧化肽的研究,为澳洲坚果抗氧化肽的开发利用提供了理论参考.