PITC柱前衍生-高效液相色谱法测大米肽中的16种氨基酸含量

TS207.3; 为了建立一种以高效液相色谱检测大米肽中氨基酸含量的方法,以异硫氰酸苯酯(Phenyl isothiocyanate,PITC)为柱前衍生剂,实现大米肽中 16种氨基酸(天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、苏氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、赖氨酸(Lys))能同时、快速、有效地分析检测.采用Athena AAA色谱柱为分析柱,以甲醇:乙腈:水=20:60:20和 50 mmol/L乙酸钠(pH6.5)为流动相,进行梯度洗脱,流速为 1.0 mL/min,柱温 35℃,紫外检测器波长为 254 nm.结果表明,16种氨基酸在 0.125～2.5 μmol/mL范围内具有良好的线性关系,14种氨基酸线性关系的决定系数R2≥0.9999,另外 2种氨基酸的决定系数R2 分别为 0.9998和 0.9994,检出限为 0.003%～0.018%,定量限为 0.010%～0.059%,加标回收率在 82.21%～103.59%,RSD均小于 5%.该方法使得大米肽中 16种氨基酸很好地分离,其中含量最高的氨基酸是谷氨酸(Glu),含量范围为 13.11%±0.39%～21.38%±0.48%,含量最低的氨基酸是组氨酸(His)或蛋氨酸(Met),含量范围为 1.59%±0.05%～2.27%±0.03%或 1.26%±0.05%～2.32%±0.06%,其准确度和精密度佳,灵敏度和回收率高,适用于大米肽的氨基酸含量分析.