产低温脂肪酶菌株鉴定、发酵条件优化及酶学性质分析

TQ925; 为筛选高产低温脂肪酶的菌株,并对产酶条件进行优化,同时为脂肪酶的工业化开发提供生产资料.从黑龙江省漠河县土壤样品中筛选出一株产低温脂肪酶菌株,通过形态学鉴定、生理生化实验及分子生物学鉴定,确定该菌株为普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica).通过单因素实验,探究温度、pH、装液量、接种量、碳源、氮源、金属离子、诱导剂等不同因素对菌株产酶的影响,通过Plackett-Burman实验,爬坡试验及响应曲面设计,优化橄榄油、蛋白胨、装液量等因素的添加量.结果表明:该菌株最优产酶条件为 20℃、pH7.5、装液量 42 mL、接种量 0.5%、20 g/L麦芽糖、14 g/L蛋白胨、0.5 g/L的MgSO4·7H2O及 46 mL/L橄榄油.此优化条件下,脂肪酶活为 98.05 U/mL,是优化前的 5.85倍.酶学性质结果表明,该脂肪酶最适温度为 30℃,属于低温脂肪酶,最适反应pH为 7,Mg2+明显可以促进酶活.有机溶剂中甲醇和乙醇明显抑制了酶活性,而正己烷明显可以促进酶活性.该结论可为微生物资源开发利用,工业生产低温脂肪酶提供一定的理论依据及方法指导.