SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定

SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定

TS201.2; 按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srtA基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni2+柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LHN-LPETG和G-HC蛋白检测SrtA蛋白活性.菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni2+柱亲和层析后得到纯度大于95％的SrtA蛋白,LHN-LPETG和G-HC蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性....

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Veröffentlicht in:食品工业科技 2021-05, Vol.42 (10), p.83-88
Hauptverfasser: 张秀娟, 于海威, 刘栋琦, 赵晋彤, 熊向华
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:TS201.2; 按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srtA基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni2+柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LHN-LPETG和G-HC蛋白检测SrtA蛋白活性.菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni2+柱亲和层析后得到纯度大于95％的SrtA蛋白,LHN-LPETG和G-HC蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2020070281