碧根果致敏原Car i 1的分离纯化及表征鉴定

目的 分离纯化碧根果致敏原Car i 1,并对其结构进行表征鉴定.方法 以新鲜碧根果果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、粗分级、凝胶过滤层析,对碧根果致敏原蛋白Car i 1 进行分离纯化.结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱法和免疫印迹法 3 种方法对Car i 1 进行鉴定,并通过圆二色谱仪与紫外分光光度计表征其二、三级结构.结果 本方法纯化获得碧根果致敏原Car i 1,单轮制备量可达5 mg以上,且纯度大于95%,蛋白质高级结构未被破坏,能够被全部3名碧根果过敏患者的血清准确识别.结论 该纯化方法技术路线简单、设备要求低且单次制备量高,总得率可达 65%,操作便捷,为碧根果致敏原Car i 1 的相关研究奠定了物质基础.