雌二醇单克隆抗体制备及胶体金侧流层析免疫分析方法的建立

目的 探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的 3 号位和 17 号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中 E2 胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidal gold-based lateral flow immunoassay,CG-LFA).方法 从E2 的 3 号位羟基和 17 号位羟基引入活性基团分别制备半抗原H1a和H2,偶联载体蛋白制备完全抗原,经过动物免疫和细胞融合筛选,制备单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs),采用间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)对mAbs性能进行评估,筛选出灵敏度最高的mAb,最后采用静电吸附法将胶体金标记抗体为探针,构建牛奶中E2 的CG-LFA.结果 制备了H1a-7B7、H1a-7B12、H1a-9C7、H1a-10E7、H2-2E2、H2-3C10、H2-4A10 和H2-6D28 种mAbs,经过icELISA评估,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.116、0.207、0.072、0.370、0.442、6.170、0.415 和 4.411 ng/mL,最终选取H1a-9C7,构建牛奶中E2 的LFA,消线(cut-off)值为 6.00 ng/mL,与苯甲酸雌二醇和雌三醇的交叉反应率分别为 101.31%和 2.43%,在真实样本加标回收实验中,检测结果与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)结果一致.结论 E2的3号位引入活性基团设计合成的半抗原所制备的E2抗体灵敏度,比17号位引入活性基团制备的抗体灵敏度高,并且建立的LFA准确度良好,为牛奶中E2快速检测提供了一定的技术手段.