芜菁多糖除蛋白及抑制RAW264.7巨噬细胞焦亡作用研究

目的 考察芜菁多糖两种方法除蛋白效果,并探讨其对RAW264.7巨噬细胞焦亡的抑制作用.方法 采用AB-8大孔吸附树脂法、Savage法去除蛋白,苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)建立细胞焦亡模型,细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测芜菁多糖对RAW264.7细胞增殖率的影响,免疫印迹实验(Western-Blot,WB)检测消皮素D(gasdermin D,GSDMD)相对表达量,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素-18(interleukin18,IL-18)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6水平.结果 AB-8大孔吸附树脂除蛋白,多糖保留率为85.9％,蛋白去除率为91.0％;Savage法多糖保留率为77.6％,蛋白去除率为72.8％,精密度、稳定性、重复性和加样回收率的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于2.0％.与模型组相比,芜菁多糖各剂量能显著下调GSDMD的表达(P