重组酶等温扩增技术快速检测对虾中的白斑综合征病毒

目的 针对对虾中白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV),分别建立基于国外专利技术的重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)方法,基于国内专利技术的重组酶介导等温扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)方法,并对两种检测方法进行比较.方法 应用重组酶等温扩增技术在恒温(39℃)条件下完成扩增反应,调整反应体系中模板DNA和探针浓度,优化WSSV病毒RPA和RAA两种方法的反应体系,建立了可靠稳定的等温扩增RPA和RAA快速检测方法,比较了两种方法的特异性、灵敏度、扩增效率和稳定性.结果 所建立的荧光RPA和RAA方法在恒温39℃的条件下特异性检测WSSV,检测构建质粒DNA的灵敏度可达到1.0×106 copies/μL,检测实际感染阳性样品的灵敏度可达到1.31×101 pg/μL;RPA方法的扩增线性曲线拟合度r2=0.9970,扩增效率为98.50％;RAA方法的扩增线性曲线拟合度r2=0.9910,扩增效率为98.50％.结论 所建立的基于重组酶等温扩增技术的RPA和RAA方法,特异性好,对于质粒和阳性样品检测灵敏度一致,扩增效率一致,具有很好稳定性,适用于水产品养殖及生产加工和通关口岸进口虾类产品中WSSV病毒的现场快速筛查防控.