磷酸氯喹对双链RNA诱导的血管内皮细胞焦亡的影响

R59; 目的·探究磷酸氯喹(chloroquine phosphate,CQ)对病毒感染中双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)所致血管内皮细胞损伤的抑制作用及机制.方法·采用聚肌胞苷(polyinosinic-polycytidylic acid,poly 1:C)刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),建立病毒性脓毒症中dsRNA诱导血管内皮细胞损伤的体外模型.将HUVEC随机分为正常对照组(NC组)、不同浓度poly Ⅰ:C组和CQ+poly Ⅰ:C组.采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同处理组HUVEC活力的变化,采用光学显微镜检测细胞形态变化,采用流式细胞术检测细胞碘化丙啶(propidium iodide,PI)阳性率(PI+)以观察细胞膜完整性,采用蛋白质印迹(Western blotting)检测焦亡相关蛋白中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、胱天蛋白酶-1 活性剪切体(cleaved caspase-1)、gasdermin D 蛋白 N端(gasdermin D N-terminal,GSDMD-N)、白介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)以及Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)的蛋白表达水平.结果·与NC组相比,poly Ⅰ:C组HUVEC活力明显降低,成熟IL-1β水平升高,细胞形态呈现膨胀"吐泡"现象,PI+率增加,焦亡相关蛋白NLRP3、cleaved caspase-1和GSDMD-N的表达升高(均P＜0.05).与poly I:C组相比,CQ+poly Ⅰ:C组的细胞活力有所增加,成熟IL-1β表达减少,膨胀及破裂的细胞比例下降,PI+降低,焦亡相关蛋白cleaved caspase-1、GSDMD-N表达减少(均P＜0.05).CQ预处理并未显著改变dsRNA诱导的NLRP3表达水平,而抑制了 TLR3的表达(P＜0.05).结论·dsRNA能够诱导HUVEC细胞焦亡;CQ能够抑制由dsRNA诱导的血管内皮细胞焦亡,该效应可能与调节TLR3表达