敲减TCF3抑制人子宫内膜基质细胞蜕膜化的研究

R711.6; 目的·探讨转录因子3(transcription factor 3,TCF3)对人子宫内膜基质细胞(human endometrial stromal cell,HESC)蜕膜化功能的影响.方法·用 8-溴腺苷3',5'-环腺苷酸(8-bromoadenosine 3',5'-cyclic adenosine monophosphate,8-Br-cAMP)和醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)方案在体外诱导HESC蜕膜化.用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默TCF3基因,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和 Western blotting验证 TCF3 的敲减效率.RT-qPCR 和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测蜕膜化标志物胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin like growth factor binding protein 1,IGFBP1)和催乳素(prolactin,PRL)的表达水平.Alexa Fluor标记的鬼笔环肽染色检测HESC蜕膜化后及敲减TCF3后细胞形态的变化.将HESC分为3组,分别为未蜕膜化+NC(转染对照siRNA)组、蜕膜化4d+NC组、蜕膜化4d+siTCF3(转染TCF3 siRNA)组,进行RNA测序;对测序结果进行聚类分析、京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)以探究TCF3调节HESC蜕膜化功能的作用机制,并采用qPCR对测序结果进行验证.结果·在HESC蜕膜化2d和4d后,TCF3的表达水平逐渐升高.蜕膜化2d和4d,ELISA和RT-qPCR结果均显示敲减TCF3后蜕膜化标志物IGFBP1和PRL的表达水平较NC组下降.鬼笔环肽染色结果表明,蜕膜化后细胞从纤细长梭形结构转变为大而圆的细胞形态,而在敲减TCF3后,细胞形态又恢复成长梭形结构.测序结果表明蜕膜化4 d和敲减TCF3后差异基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体通