miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC－823／CDDP耐药性的影响

目的观察miRNA765高表达对胃癌顺铂（CDDP）耐药细胞株BGC一823／CDDP耐药性的影响。方法将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体，构建miRNA重组表达载体；阳离子脂质体转染重组质粒到BGC．823／CDDP细胞。转染后48h，Real—TimePCR和Westernblotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1（CIAPINl）蛋白的相对表达量；采用不同浓度CDDP处理转染后48h的BGC-823／CDDP细胞，24和48h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度（IC50）。采用终质量浓度为1ixg／mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823／CDDP细胞，双染法检测细胞凋亡率。结果BGC一823／CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823，CIAPINl蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株（均P〈0．01）。在BGC-823／CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPINl蛋白的表达，转染后48h的CIAPINl蛋白表达量明显低于未转染组（P〈0．01）；miRNA765高表达可明显降低BGC-823／CDDP细胞的耐药能力，48h后Ic50值从（18．27±3．92）Ixg／mL降至（1．50d-O．43）μg／mL（P〈0．05）。转染48h后，BGC-823／CDDP细胞的凋亡率从（10．14-1．7）％上升至（53．4±7．9）％（P〈0．01）。结论miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823／CDDP的耐药能力。