基于Nrf2/HO-1启动子筛选抗水生病毒药物的方法

S942; 为建立基于Nrf2、HO-1 启动子活性的抗病毒药物筛选方法,实验以胖头鱥上皮细胞系(FHM)为材料,构建Nrf2、HO-1 启动子重组质粒,利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度(0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0 μg/mL)的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素对启动子活性的影响,并利用鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)和蛙虹彩病毒(rana grylio iridovirus,RGV)验证阳性药物的抗病毒效果.结果显示,Nrf2、HO-1 启动子序列中存在FOX家族、IRF家族等多种转录因子的结合位点,并分别存在 1个和 3 个与甲基化相关的CpG岛.双荧光素酶报告实验显示,水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素可激活Nrf2、HO-1 启动子.药物浓度梯度实验显示,6.3 μg/mL的姜黄素和穿心莲内酯可显著上调Nrf2 和HO-1 的启动子活性.病毒感染后的细胞病变效应、病毒的复制及病毒滴度结果均表明姜黄素和穿心莲内酯可抑制SVCV和RGV的感染.综上,本实验建立的pGL3-Nrf2 和pGL3-HO-1 启动子报告质粒,可用于抗水生病毒药物的筛选,也为Nrf2、HO-1 转录调控机制的研究提供了工具.