草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定

Q511%S942; Ⅱ型干扰素(IFN-γ)是参与辅助性T淋巴细胞1(Th1)免疫应答的关键细胞因子之一.为研究产生IFN-γ和干扰素-γ相关因子(IFN-γrel)的细胞来源及功能差异,实验构建原核表达质粒,在大肠杆菌DE3中表达草鱼(Ci)IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白.结果显示,重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白,而CiIFN-γrel蛋白则不可溶.通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白,免疫小鼠制备了单克隆抗体.通过Western blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体.研究表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γ...

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Veröffentlicht in:	水产学报 2022, Vol.46 (8), p.1487-1498
Hauptverfasser:	朱晓真, 王俊亚, 贾钊, 王梓璇, 王邦杰, 邹钧
Format:	Artikel
Sprache:	chi
Online-Zugang:	Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:	Q511%S942; Ⅱ型干扰素(IFN-γ)是参与辅助性T淋巴细胞1(Th1)免疫应答的关键细胞因子之一.为研究产生IFN-γ和干扰素-γ相关因子(IFN-γrel)的细胞来源及功能差异,实验构建原核表达质粒,在大肠杆菌DE3中表达草鱼(Ci)IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白.结果显示,重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白,而CiIFN-γrel蛋白则不可溶.通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白,免疫小鼠制备了单克隆抗体.通过Western blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体.研究表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应,反之亦然,其中FITC标记的2株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析.此外,Western blotting分析显示,草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白.本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体,为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础.
ISSN:	1000-0615
DOI:	10.11964/jfc.20210813043