四联鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ毕赤酵母重组质粒构建及其表达

Q816; 利用重组毕赤酵母表达四联鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ以实现高效制备.根据鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ的氨基酸序列,以及胰弹性蛋白酶和羧肽酶A的特异性裂解位点,设计四联鲎抗菌肽(4TpⅡ)序列,按照毕赤酵母密码子偏好性进行优化,经EcoRⅠ和Not Ⅰ双酶切后构建重组质粒pPICZαA-4TpⅡ,电转至毕赤酵母X-33,利用Zeocin抗性筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达后SDS-PAGE分析.成功构建重组质粒pPICZαA-4TpⅡ,并筛选出阳性转化子,经 30℃、250 r/min、1%甲醇诱导表达 5d后,获得重组蛋白,可为高效制备鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ奠...

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Veröffentlicht in:	科技创新与应用 2024, Vol.14 (7), p.47-50
Hauptverfasser:	曾臻, 罗家英, 蔡依婕, 上官雪茹, 黄艺虹, 李雅婷, 李婉褀, 谭强来
Format:	Artikel
Sprache:	chi
Online-Zugang:	Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:	Q816; 利用重组毕赤酵母表达四联鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ以实现高效制备.根据鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ的氨基酸序列,以及胰弹性蛋白酶和羧肽酶A的特异性裂解位点,设计四联鲎抗菌肽(4TpⅡ)序列,按照毕赤酵母密码子偏好性进行优化,经EcoRⅠ和Not Ⅰ双酶切后构建重组质粒pPICZαA-4TpⅡ,电转至毕赤酵母X-33,利用Zeocin抗性筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达后SDS-PAGE分析.成功构建重组质粒pPICZαA-4TpⅡ,并筛选出阳性转化子,经 30℃、250 r/min、1%甲醇诱导表达 5d后,获得重组蛋白,可为高效制备鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ奠定基础.
ISSN:	2095-2945
DOI:	10.19981/j.CN23-1581/G3.2024.07.011