金针菇菌糠纤维素降解菌的分离、生物学特性及酶活性分析

S816.35%X172; [目的]分离筛选金针菇菌糠来源的纤维素降解菌,研究其生物学特性和所产纤维素降解酶活性,为菌糠资源的饲料化利用提供技术支撑.[方法]采用稀释涂布法接种金针菇菌糠样品,采用硝酸纤维素钠培养基进行纤维素降解菌的分离培养,利用刚果红培养基初步分析分离菌株的纤维素降解能力;通过 16S rDNA测序分析和生物安全性预测挑选候选菌株,然后进行生理生化特性分析、不同温度下生长曲线测定以及纤维素降解酶活性动态分析.[结果]样品经硝酸纤维素钠培养基筛选培养后获得30 个独立菌落,所有菌株在刚果红培养基上都能形成明显的透明圈,部分菌株具有较强的纤维素降解能力.16S rDNA测序分析显示,30 株分离菌被鉴定为韩国假单胞杆菌、明斯特小陌生菌、深红沙雷菌等 9 个菌种;结合生物安全性预测及纤维素降解能力初筛结果,选取韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis,编号:JK-32)、明斯特小陌生菌(Advenella mimigardefordensis,编号:JK-52)、深红沙雷菌(Serratia rubidaea,编号:JK-56)、马葡萄球菌(Staphylococcus equorum,编号:JK-57)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophytics,编号:JK-62)、黏质沙雷菌(Serratia marcescens,编号:JK-66)作为候选菌株开展后续试验.生理生化特性分析结果显示,6 株候选菌株接触酶活性试验均为阳性,甲基红试验和二乙酰试验均为阴性.JK-62 株的生长受温度影响较小,细菌生长速率和最终细菌浓度在所有候选菌株中表现较好;JK-56 株在温度较低(28～34℃)的培养条件下,生长速率和最终细菌浓度均低于其他候选菌株,而当培养温度上升到 40℃时,其生长速率与其他菌株相近,并且最终细菌浓度较高.在培养第 1～7 天,JK-56 株的内切葡聚糖酶活性在所有菌株中均最高;在培养第 2、4、5 天,JK-66 株的内切葡聚糖酶活性显著(P＜0.05)高于CK菌株.JK-66 株的外切葡聚糖酶活性较高,在不同检测时间点均显著(P＜0.05)高于CK菌株;在培养第 2～4 天,JK-56 株的外切葡聚糖酶活性显著(P＜0.05)高于CK 菌株.JK-66 株的β-葡萄糖苷酶活性在候选菌株中表现较好;在培养第 3～7 天,JK-56 株的β-葡萄糖苷酶