毛竹miR397和miR1432的克隆及其逆境胁迫响应表达分析

【目的】miRNA作为一种非编码基因在植物生长发育以及抗逆等过程中起着重要的调控作用。通过分析毛竹 miR397和 miR1432前体序列的结构特点，研究其组织表达特异性，分析其经光照、温度、干旱、NaCl等非生物胁迫以及激素处理后的表达变化，以期为进一步揭示其功能以及未来竹子抗逆育种的分子设计提供参考。【方法】通过茎环引物法和 RT-PCR技术，以毛竹为材料分离 miR397和 miR1432的前体序列，利用在线平台 Web LOGO分析 miRNA成熟序列的碱基保守性，用 MEGA 6.0软件构建基于 miRNA 前体的系统进化树。借助在线平台 RNAfold WebServer预测二者前体二级结构。直接从 BambooGDB下载 phe-miR397和 phe-miR1432前体上游的1500 bp序列，利用在线平台 Plant CARE 分析其所含作用元件。采用实时定量 PCR 方法分析 phe-miR397和 phe-miR1432在毛竹根、茎、叶和鞘中的表达情况，以及检测经黑暗、强光（1500μmol·m －2 s －1）、高温（42℃）、低温（4℃）、NaCl（250 mmol·L －1）、GA3溶液（100μmol·L －1）、ABA溶液（100μmol·L －1）处理2 h后毛竹叶片中 phe-miR397和 phe-miR1432的表达变化。【结果】从毛竹中分别克隆出 miR397和 miR1432的前体序列，均为88 bp，且分别包含其成熟序列，均为21 bp。前体序列均能形成稳定的茎环结构，且成熟序列均产生于前体茎环结构5＇端臂上。miR1432家族成熟序列的碱基保守性整体高于 miR397家族。毛竹二者前体上游调控区均含有启动子基本作用元件，如 TATA-box，CAAT-box；同时存在很多逆境（光、干旱、温度等）胁迫相关响应元件以及激素响应元件等，意味着 phe-miR397和 phe-miR1432可能受到逆境胁迫和激素的调节。phe-miR397和phe-miR1432均在叶鞘中表达丰度最高，最低丰度 phe-miR397出现在幼茎中，而 phe-miR1432则在叶片中。经强光、黑暗、高温、低温、NaCl等胁迫处理后，叶片中 phe-miR397和 phe-miR1432的表达均下调；干旱和 ABA 处理后，phe-miR397的表达下调，而 phe-miR1432则上调； G