黑腹果蝇头部中RNA结合蛋白RBP9的互作蛋白筛选

Q966; [目的]筛选RNA结合蛋白RBP9在黑腹果蝇Drosophila melanogaster头部中的互作蛋白.[方法]利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,分别将3 x Flag和V5标签编码序列插入到黑腹果蝇成虫头中RBP9和FNE基因起始密码子ATG的后面,构建黑腹果蝇转基因品系3×Flag-RBP 9/3 x Flag-RBP9(3FRBP9)和V5-FNE/V5-FNE(VFNE);利用免疫沉淀和质谱法鉴定黑腹果蝇3FRBP9和野生型品系成虫头部中RBP9的互作蛋白并进行生物信息学分析.利用免疫共沉淀方法检测RBP9与FNE蛋白之间的相互作用.[结果]质谱法从黑腹果蝇成虫头部共鉴定了 190个与RBP9相互作用的蛋白,其中包括ELAV和FNE.KEGG富集分析显示这些蛋白的基因主要参与核糖体、碳代谢、三羧酸循环、氨基酸生物合成等通路.免疫共沉淀实验结果验证了 RBP9与FNE蛋白之间存在相互作用.[结论]RNA结合蛋白ELAV家族成员在黑腹果蝇成虫头部中具有相互作用.本研究为RBP9在果蝇神经系统发育中的功能研究提供了重要实验依据.