双委夜蛾气味结合蛋白AdisOBP6的原核表达、抗体制备及表达谱分析

Q966; [目的]本研究旨在对双委夜蛾Athetis dissimilis气味结合蛋白OBP6进行原核表达、抗体制备以及表达谱分析,便于今后对AdisOBP6功能展开研究.[方法]利用生物信息学软件分析AdisOBP6蛋白结构特征;利用通过原核表达获得的重组蛋白4次免疫新西兰大白兔,制备AdisOBP6抗体;采用荧光定量PCR和Western blot技术检测AdisOBP6在双委夜蛾雌雄成虫触角、不同时期精巢以及受精卵和未受精卵中的表达情况.[结果]同源建模预测显示,AdisOBP6具有6个保守半胱氨酸残基和7个α-螺旋结构,并折叠成一个结合口袋.原核表达结果显示,在20℃下0.5 mmol/LIPTG诱导重组蛋白表达量最多、最稳定.4次免疫重复中,抗体效价分别超过1∶512 000,1∶512 000,1∶512 000和 1∶64 000.Western blot 检测获得的抗体与 AdisOBP6蛋白能够特异性结合.荧光定量PCR结果显示,AdisOBP6在双委夜蛾精巢中的表达量远高于在触角中的,在幼虫期精巢中AdisOBP6就已经开始表达,在蛹期精巢中表达量低于在幼虫期的,成虫羽化后精巢中的表达量逐渐进入高峰,在未受精卵和受精卵中几乎不表达或表达量极低.Western blot分析发现,AdisOBP6蛋白也主要在精巢中表达,在雌雄成虫触角、受精卵和未受精卵中表达量很低.[结论]本研究实现了 AdisOBP6的原核表达,成功地制备了抗体;并证实AdisOBP6在双委夜蛾精巢中大量表达,成虫羽化后表达量达到高峰,推测AdisOBP6可能参与了授精过程.本研究结果为今后进一步研究AdisOBP6的功能奠定了基础.