小鼠子宫内电转基因方法的建立

目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠侧脑室，在电压40V、每次脉冲60ms，间隔940ms，电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因，电转后24h取材，甲醛固定冷冻冠状切片，DAPI染细胞核观察组织形态结构变化，荧光免疫组织化学检测α-SMA的表达差异。结果：妊娠15d孕鼠转染24h后小鼠成活率80％（8／10），胚胎成活率为54．2％（13／24），存活胚胎GFP阳性表达率为61．5％（8／13），GFP阳性表达胚胎脑组织切片，基因转染区域和正常组织区组织形态结构和α-SMA表达不存在差别。结论：成功建立了小鼠子宫内电转基因的方法。