人胚胎干细胞H1培养条件的优化

目的：采用不同培养基和饲养层培养人胚胎干细胞H1，建立适合H1细胞增殖的最佳条件并分析其基本生物学特性。方法：鼠源性饲养层采用ICR品系小鼠胚胎成纤维细胞（MEF），人源性饲养层采用人胚胎成纤维细胞系（HFF-1）。H1基本培养基配制分别采用传统DMEM／F12和改良培养基Knock-out^TM DMEM。实验共分为MEF＋DMEM／F12、MEF＋K-DMEM、HFF＋DMEM／F12、HFF＋K—DMEM组。H1基本生物学特性检测采用免疫荧光、RT—PCR、碱性磷酸酶和核型分析。结果：MEF＋DMEM／F12组中H1克隆形态规则，不发生分化，增殖速度快；而MEF＋K—DMEM组细胞克隆传代后第4日发生分化；HFF＋DMEM／F12组和HFF＋K—DMEM组细胞传代后第3日就显示出分化趋势，克隆变扁。MEF＋DMEM／F12组中H1细胞保持正常核型和基本生物学特性。结论：不同的人胚胎干细胞系最佳培养条件是不同的，建立的MEF＋DMEM／F12组培养条件最适合H1细胞增殖。