腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪间充质干细胞的实验研究

目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2（Ad—hBMP-2）基因转染大鼠脂肪间充质干细胞（ADSCs）的可行性及其成骨特性。方法取4周龄SD大鼠腹股沟的脂肪组织，经体外分离培养的方法获得ADSCs，分别转染以腺病毒为载体的绿色荧光蛋白（Ad—GFP）基因和Ad—hBMP-2基因。用荧光显微镜每隔12h观察转染Ad—GFP的细胞，并确定转染率，观察其形态变化，绘制生长曲线；利用免疫细胞化学法对转染Ad—hBMP-2的细胞作碱性磷酸酶（ALP）染色，用免疫细胞化学法作骨钙素（OC）检测确定成骨活性，Western blot法检测hBMP-2的表达。结果12h后荧光显微镜观察转染Ad—GFP的细胞，有52％的阳性表达细胞，48h后转染率达95％；转染Ad—hBMP-2后倍增时间延长，ALP、OC检测为阳性表达，hBMP-2蛋白转染后48h为阳性表达，并持续至第5代。结论ADSCs可以作为腺病毒转染的载体，转染Ad-hBMP-2基因后有明显的成骨作用，可以作为骨组织工程的种子细胞。