MiR-1-3p通过靶向FZD7增强卵巢癌细胞对铁死亡的敏感性

目的:卷曲蛋白7(Frizzled 7,FZD7)在多种癌症中异常表达和激活.在卵巢癌中,FZD7的过表达可降低铂耐药性卵巢癌细胞对铁死亡的敏感性,从而使癌细胞存活,但FZD7是否抑制卵巢癌细胞铁死亡及其相关机制尚未被阐明.本研究通过探究FZD7及其上游调控因子miR-1-3p对卵巢癌细胞铁死亡的影响,旨在明确miR-1-3p及FZD7参与卵巢癌细胞铁死亡的分子机制.方法:以人卵巢癌细胞系HO8910和SKOV3为研究对象,第1部分实验将空白质粒和FZD7过表达质粒分别转染人卵巢癌细胞;第2,3部分实验将miR-1-3p模拟物阴性对照、miR-1-3p模拟物、miR-1-3p抑制剂阴性对照和miR-1-3p抑制剂分别转染人卵巢癌细胞;第4部分实验将miR-1-3p模拟物、miR-1-3p模拟物+FZD7过表达质粒分别转染人卵巢癌细胞,另设正常培养的对照组.采用铁死亡诱导剂Erastin或RSL3分别孵育经不同处理后的人卵巢癌细胞构建人卵巢癌细胞铁死亡模型.使用real-time RT-PCR检测FZD7和miR-1-3p的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测FZD7的蛋白质表达水平,CCK-8实验检测细胞活力,脂质过氧化比色测定试剂盒检测细胞内MDA水平,铁检测试剂盒检测细胞内Fe2+水平,双荧光素酶实验检测miR-1-3p和FZD7的靶向关系.结果:FZD7的过表达提高经Erastin或RSL3处理的人卵巢癌细胞系HO8910或SKOV3细胞的活力(P