MiR-133b通过抑制SOX4调节膀胱癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力

目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制仍不十分清楚.虽然研究表明miR-133b可调控膀胱癌的发生,但其机制尚未明确.性别决定基因-区域转录因子4(sex determining region Y-box transcriptim factor 4,SOX4)在肿瘤的发生中起至关重要的作用,目前尚不清楚在膀胱癌中miR-133b与SOX4是否存在相互作用.本研究旨在探究膀胱癌组织和细胞中miR-133b和SOX4的表达情况及其对膀胱癌细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的调控作用,并探讨在调节膀胱癌细胞生物特性过程中miR-133b与SOX4的相互关系.方法:获取2015年1至6月在中南大学湘雅二医院行手术切除的10例患者的膀胱癌及邻近癌旁组织标本,分别采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织、癌旁组织、膀胱癌细胞系及正常膀胱上皮细胞中miR-133b的mRNA表达水平和SOX4的蛋白质表达水平.利用数据库TargetScan预测SOX4与miR-133b的相关性.利用脂质体Lipofectamine 2000为载体,将miR-133b模拟物、抑制物或SOX4的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染至T24细胞.应用双荧光素酶报告基因检测系统检测高表达miR-133b对T24细胞表达SOX4的影响.体外培养T24细胞14 d,计数培养克隆数并计算克隆形成率.使用CCK-8试剂盒检测T24细胞在不同时间点(0、12、24、48、72、96 h)的增殖情况.应用Transwell检测T24细胞的侵袭能力.结果:与癌旁组织和正常膀胱上皮细胞比较,膀胱癌组织和膀胱癌细胞系均低表达miR-133b、高表达SOX4,并且miR-133b mRNA与SOX4蛋白质在膀胱癌组织中的表达水平呈负相关(r=?0.84).TargetScan数据库预测SOX4存在miR-133b结合位点,miR-133b模拟物转染可抑制膀胱癌T24细胞内SOX4的表达.MiR-133b模拟物或shRNA-SOX4转染均能抑制膀胱癌T24细胞的体外增殖、克隆形成和侵袭能力.相对于转染miR-133b抑制物,miR-133b抑制物和shRNA-SOX4共转染能够显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力.结论:MiR-133b和SOX4均能参与调控膀胱癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力,并且m