shRNA介导GSTP1基因沉默对激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145的影响

目的：探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1（glutathione S-transferase P1,GSTP1）基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法：根据选取靶序列形成短发卡状RNA（short hairpinRNA,shRNA）的DNA模板设计3条表达载体（shRNA255,shRNA554,shRNA593）,并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo。经酶切和测序鉴定,筛选转染率最高基因沉默效果最好的shRNA作RNA干扰。DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组。转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶（fluorouracil,FU）组及紫杉醇（paclitaxel,PA）组,并按作用浓度（FU：30,60,120,240μg/mL;PA：0.2,2,10,20μg/mL）分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组。四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法（terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果。结果：3条表达载体（pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593）的转染率分别为（63.3±1.04）%,（76.2±0.68）%,（72.7±0.33）%,shRNA554转染率最高,三者之间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分别为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均最低,三者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。MTT检测转染前FU不同浓度（30,60,120,240μg/mL）四个亚组作用后细胞存活率分别为（95.60±2.11）%,（90.20±0.86）%,（83.10±3.1