Akt基因治疗大鼠肝硬化门静脉高压症

目的：探讨肝硬化时肝组织内Akt和eNOS的活化是否受到抑制以及腺病毒介导的Akt基因治疗门静脉高压症的可行性。方法：以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt和Ad-EGFP。采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型。取10只正常大鼠作为对照，另取40只肝硬化大鼠随机均分为4组：未处理组、Akt治疗组、EGFP组和生理盐水组。后3组分别经尾静脉分别注射Akt重组腺病毒、Ad-EGFP和生理盐水后，3d后，分别测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率。用免疫印迹法检测各组大鼠肝组织内Akt，p-Akt，eNOS，p-eNOS蛋白的表达；硝酸还原酶法检测各组肝内NO含量。EGFP组于转染后3d处死大鼠，取肝、心、肺、肾、脑、脾和睾丸，快速冰冻切片，观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果：Ad-myr-HA-Akt和Ad-EGFP经纯化后滴度分别为5、5×10^11 vp／mL和6．0×10^11 vp／mL。肝硬化大鼠肝内Akt和eNOS的活化均受到抑制，肝内NO生成减少，门静脉压力升高。Akt重组腺病毒治疗能使受到抑制的Akt和eNOS磷酸化得到恢复，同时增加肝内NO含量，降低门静脉压力。而经Ad-EGFP和生理盐水处理组，Akt和eNOS磷酸化不能恢复，肝内NO含量和门静脉压力与未经治疗大鼠相似。EGFP组在Ad-EGFP转染后3d肝组织中可见大量绿色荧光。肺和肾组织中仅见少量荧光，而其他实质器官未见EGFP表达。结论：肝硬化时，大鼠肝内Akt和eNOS的活化均受到抑制，导致NO生成减少而肝内血管阻力增加，表现为门静脉压力升高。以腺病毒介导的Akt基因治疗门静脉高压症可行。