cry基因保守序列克隆及其在大肠杆菌Rosetta（DE3）中的表达

S; [目的]对cry基因保守序列进行克隆，并使其在大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行表达。[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列，采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列，构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中，利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达。同时，分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响。[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列，长度分别为304和853bp；SDSPAGE检测结果显示，经IPTG诱导后重组质粒pGEX4t1304和pGEX4t1853成功地表达了大量GST融合蛋白，分子量分别为39和62．4kDa，与预期结果一致；确定了IPTG最佳诱导浓度为0．15mmol/L，最佳诱导时间为7h.[结论]为今后检测转胁基因农作物奠定了基础。