A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测

S8; [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测.[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化.[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33 Ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较...

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Veröffentlicht in:农业科学与技术（英文版） 2010, Vol.11 (2), p.23-26
Hauptverfasser: 李菁, 林彤, 高闪电, 丛国正, 独军政, 邵军军, 常惠芸
Format: Artikel
Sprache:chi
Online-Zugang:Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:S8; [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测.[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化.[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33 Ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应.[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础.
ISSN:1009-4229
DOI:10.3969/j.issn.1009-4229-B.2010.02.032