circROBO1上调KLF5促进视网膜细胞瘤侵袭的机制研究

R739.7; 目的:探索circROBO1通过上调KLF5促进视网膜Y79细胞侵袭的作用及其可能的调控机制.方法:RNase R酶消化及qRT-PCR实验检测环状RNA circROBO1在视网膜Y79细胞中的结构稳定性;分别提取视网膜Y79细胞的胞质及胞核RNA,进行circROBO1的亚细胞定位分析;采用siRNA沉默视网膜Y79细胞中circROBO1的表达,划痕实验、Transwell细胞侵袭与迁移实验检测circROBO1对Y79细胞迁移与侵袭能力的影响;通过CircInteractome及TargetScan在线软件分别预测circROBO1 与下游miRNA及miRNA与下游靶基因KLF5的靶向结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向调控关系.蛋白免疫印迹实验检测siRNA沉默Y79细胞中circROBO1的表达后对KLF5表达的影响.结果:与未经RNase R酶处理的对照组相比,circROBO1的相对表达量在RNase R酶处理后并无显著变化;而线性ROBO1的相对表达量在经RNase R酶处理后,则显著降低(t=16.18,P