RNAi逆转肾癌细胞MDR1基因表达导致的替尼泊苷耐药

目的：研究RNA干扰（RNAinterference，RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因（MDRl）表达的抑制作用，并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷（VM一26）敏感性的变化。方法：根据MDRI基因设计3条小干扰RNA（smalJinterferingRNA，siRNA）序列，在质粒的介导下转染肾癌A498细胞，RT—PCR法分析转染前后MDRlmRNA表达水平，筛选出干扰效率最高的siRNA序列；进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒，感染A498细胞，RT—PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆，Westernbolt法检测MDRl蛋白表达水平，MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度（ICSO）的变化。结果：3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDRl基因的表达，其中siRNA一1序列能更有效地封闭MDRl基因，使MDRlmRNA表达水平下降67％；筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比，MDRl蛋白表达量明显下降，并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79．8％，差异具有统计学意义（P〈O．01）。结论：RNAi可抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药，使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。