原代SD仔鼠心肌成纤维细胞分离与培养方法的改进

R-332; 目的 探索更好的原代心肌成纤维细胞分离与培养的方法.方法 将取出的10只SD仔鼠心室组织置入预冷的PBS中修剪、冲洗后移入无菌玻璃瓶中剪碎;应用胰酶消化液进行初步消化;应用磁力搅拌器搅拌代替滴管吹打混匀Ⅱ型胶原酶消化液与心肌组织块促进消化顺利进行;应用差速贴壁方法分离成纤维细胞与心肌细胞;应用倒置显微镜观察细胞形态均一性、免疫荧光染色检测Vimentin及CD31表达鉴定心肌成纤维细胞纯度;检测心肌成纤维细胞对TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化评估分离的心肌成纤维细胞质量.结果 磁力搅拌器搅拌混匀胶原酶消化液与心肌组织块的方法引起的细胞损伤小,消化充分,分离细胞纯度高(Vimentin+/CD-31-,P2代成纤维细胞纯度可达95％以上),细胞活力好,贴壁时间短(约20 min已开始贴壁,90 min贴壁完全),分离所的心肌成纤维细胞激活程度低(α-SMA表达水平低),对TGF-β1诱导刺激反应好(α-SMA表达水平急剧升高).结论 磁力搅拌器方法可成功分离建立高质量的心肌成纤维细胞系.