白蚁内切-β—1，4-葡聚糖酶基因的克隆、表达、纯化及酶学性质的研究

提取了台湾家白蚁总RNA并反转录获得eDNA，PCR扩增出白蚁内切葡聚糖酶的基因，并将目的基因分别克隆到大肠杆菌和酿酒酵母载体中，构建了产内切-β-1，4-葡聚糖酶的基因工程菌。由于大肠杆菌会有少量的泄漏表达，而所用的酿酒酵母表达载体是本实验室构建带有INU信号肽的表达载体，故都可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶（CMCase）活性的重组转化子。利用金属镍亲和层析对大肠杆菌表达的内切-β-1，4-葡聚糖酶进行纯化，CMC酶活检测显示纯化酶的最适温度和最适pH值分别为42℃、6．5；内切-β-1，4-葡聚糖酶的Vmax为0．071mg／mL·min，Km值为80．2712mg／mL。