同时利用AOX1和GAP启动子表达SAM合成酶促进重组毕赤酵母中S-腺苷甲硫氨酸积累

利用重组毕赤酵母（Pichia pastoris）强化表达s腺苷甲硫氨酸（S-Menosylmethionine，SAM）合成酶（SAM synthetase，SAMS），发酵生产SAM时，胞内SAMS活性和ATP水平是影响SAM合成的重要因素。为了同时保持较高的SAMS活性和ATP供应，我们构建了一株既含有AOX1诱导型表达单元，又含有GAP组成型表达单元的双SAMS表达单元P.pastoris重组菌株Gd。它既能受甲醇调控表达SAMS，又能以甘油为碳源表达SAMS。在培养过程中，先是以甲醇诱导SAMS表达，得到较高的酶活，然后在发酵中后期再将碳源换为甘油。这样不但可以维持较高的酶活，而且可以提高胞内ATP含量。实验结果显示，对于同时利用AOX1和GAP启动子表达SAMS的重组菌，可采取甲醇和甘油两阶段补料，该重组菌的SAMS比产率高于组成型重组菌Xg，Gd进入甘油补料期后胞内ATP含量高于诱导型重组菌Ga。双表达单元菌株Gd的SAM产量达到1.41g／L，比诱导型表达SAMS的重组菌株提高了76．3％，比组成型表达SAMS的重组菌株提高了60．2％。