一种快速筛选海藻糖合成酶突变体体系的建立

利用λRed重组系统对大肠杆菌JM109的6-磷酸海藻糖合成酶基因OtsA和6-磷酸海藻糖酯酶基因otsB进行敲除，获得otsA和otsB基因失活的大肠杆菌突变体，该突变体由于对渗透压变得非常敏感，在含5％NaCl和0．5％麦芽糖的培养基中生长缓慢，然而当导入有活力的外源海藻糖合成酶基因后，由于能在胞内合成海藻糖，增强了细胞抗高渗透压培养基的能力，因而可让otsA和otsB基因缺失后的JM109得以恢复其生长能力。通过比较它们在高渗透压的培养基中的生长速度，可以筛选出合有不同活力的海藻糖合成酶突变体。