小鼠颌下腺类器官辐射损伤模型的建立

R33; 目的:本实验拟建立小鼠颌下腺(SMG)的类器官辐射损伤模型,为唾液腺辐射损伤修复相关研究提供模型支持.方法:取4周龄小鼠SMG组织利用胶原酶消化成单细胞悬液,接种于基质胶中培养并传代.利用倒置相差显微镜观察SMG类器官生长形态.组织包埋后通过免疫荧光技术检测细胞角蛋白(CK8)及水通道蛋白(AQP5)表达情况.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中唾液淀粉酶(AMS)含量,利用电子直线加速器对小鼠SMG类器官模型进行不同剂量(0Gy、5 Gy、10 Gy、15 Gy)的X线照射;通过ATP细胞活力试剂盒检测各组细胞活性.结果:小鼠SMG类器官呈类圆形球体生长,随着传代培养可见小叶结构形成.小鼠SMG类器官中CK8、AQP5染色阳性,细胞培养上清液中可检测到AMS表达,证实SMG类器官属腺上皮来源并具有分泌AMS功能.放射性照射使类器官增殖速度减慢,球体周围近似崩解形态.ATP细胞活力检测显示,细胞活力随着照射剂量的增加而下降(P＜0.05),照射剂量为10Gy时,细胞活力约为0Gy组的50％.结论:小鼠SMG类器官辐射损伤模型构建成功,且10 Gy为唾液腺辐射损伤修复相关研究的最适宜的放射剂量.