植烟土壤中枯萎病菌和黑胫病菌的快速检测方法

S432.4+4; [目的]枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害,为害严重,建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)快速检测方法,为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持,保障烟草行业的稳定生产.[方法]以采集广西百色地区土传病害土壤与健康土壤为测试材料,以标准病原菌为参考模板建立标准曲线,利用尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的保守区域设计的引物,根据目标条带及荧光定量PCR(qPCR)的溶解曲线与循环阈值(Ct值)筛选出特异性引物;同时,改进土壤中微生物DNA试剂盒提取方法,建立PCR和qPCR检测体系.[结果]分别筛选出一对尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的特异性的引物Pn3和JBR,模板浓度在1×102～1×10-4 ng之间,具有良好的线性关系,两种病原菌的DNA数量在发病土壤高于健康土壤.风干土壤并研磨再加两次洗脱有助于提取土壤中病原菌的DNA,建立了以普通PCR预扩增反应得到的产物作为模板的qPCR检测方法.[结论]PCR和qPCR联用技术能快速地分辨和检测尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌,对枯萎病和烟草黑胫病实时监测和前期预警具有重要作用.