大鼠血液外泌体中外源性γ-羟基丁酸的检测

DF795.1; 目的 建立基于外泌体的超高效液相色谱-质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)定量检测大鼠血液中的γ-羟基丁酸(gamma-hydroxybutyrate,GHB),寻找区分内源性GHB和外源性GHB的方法.方法 将成年雄性SD大鼠分为给药1 h、5 h、10 h组与对照组,给药组单次腹腔注射GHB前体物质γ-丁内酯(gamma-butyrolactone,GBL)后,分别于注射后1 h、5 h、10 h腹主动脉采血5 mL,对照组给予等量生理盐水后1 h采血5 mL.其中0.5 mL血液经前处理后直接进行UPLC-MS检测,剩余血液经差速超速离心提取外泌体后进行检测.结果 对照组大鼠血液中GHB质量浓度为(87.36±33.48)ng/mL,给药1 h、5 h和10 h组大鼠血液中GHB质量浓度分别为(110400.00±1766.35)、(1479.00±687.01)和(133.60±12.17)ng/mL.外泌体检测结果显示,对照组及给药10 h组均未检测到GHB峰值信号,给药1 h和5 h组GHB质量浓度分别为(91.47±33.44)和(49.43±7.05)ng/mL.结论 通过提取大鼠血液外泌体后经UPLC-MS法检测GHB,证实外源性GHB可在血液外泌体中检出,而内源性GHB则不能检出,提示该方法可能作为判断是否有外源性药物摄入的依据.