基于流式细胞术的活性多环芳烃降解菌检测技术

建立了流式细胞术快速检测多环芳烃降解菌数量和活性细菌的方法.用超纯水制备1×103～1×105 cells/mL多环芳烃降解菌的菌悬液,利用SYBR Green/碘化丙啶(SG/PI)进行染色,采用流式细胞仪进行检测.以FL1和FL3为检测器检测荧光强度,设定阈值为600,菌悬液流速为33 mL/min,计数率保持在1000 cells/s以下,所得降解菌数量的测定结果与平板计数法测定结果之间具有很好的相关性,相关系数为0.9742～0.9962.在检测活性多环芳烃降解菌时,利用NaClO将处于生长期的多环芳烃降解菌灭活,并作为阴性对照,未灭活细菌作为阳性对照,SG/PI双染法进行染色后,采用流式细胞术进行测定,根据阳性和阴性对照菌在流式细胞仪检测结果图中出现的位置,确定了活性细菌区和死细菌区,通过区域划分可确定体系中活性细菌数量.平板计数法检测细菌需48 h,而本研究利用流式细胞法进行细菌的检测,测定时长仅2 h,极大地提高了检测效率.本研究为快速准确测定多环芳烃降解菌提供了新方法,同时为多环芳烃降解体系中微生物检测的实际应用提供了参考.