YB1在肝癌细胞中通过抑制microRNA生物合成调控miR-205/200b-ZEB1轴

背景 与目的Y-box结合蛋白(YB1或YBX1)在肿瘤发生和癌症进展中发挥关键作用.然而,YB1是否可以通过调节非编码RNAs来影响肿瘤的恶性转化仍是未知的.本研究旨在探讨YB1与microRNAs之间的关系,并揭示YB1通过miRNAs介导的调控网络影响肿瘤进展的潜在机制.方法 通过细胞增殖、伤口愈合和Transwell侵袭实验,研究YB1在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的生物学功能.在HCC细胞系中进行微阵列分析,筛选YB1引起失调的miRNAs.通过实时荧光定量PCR、双荧光素酶报告基因、RNA免疫沉淀和pull-down实验分析YB1对miR-205和miR-200b的调控.通过pull-down实验和免疫共沉淀实验确定了YB1、DGCR8、Dicer、TUT4和TUT1之间的关系.采用免疫荧光染色法检测YB1、DGCR8和Dicer的细胞共定位.通过BALB/c裸鼠尾静脉注射转染了YB1 shRNA或shControl的MHCC97H细胞,检测YB1在体内对肿瘤转移的影响.采用免疫印迹法和免疫组化法检测上皮细胞向间充质转化标志物的表达水平.结果 YB1不依赖Snail途径,通过调控miR-205/200b-ZEB1轴促进HCC细胞迁移和肿瘤转移.YB1与微处理器DGCR8和Dicer以及通过保守序列CSD(code shock domain)与尿苷酸末端转移酶TUT4及TUT1发生相互作用,抑制miR-205和miR-200b生物合成.随后,下调的miR-205和miR-200b增强了ZEB1的表达,从而促进细胞迁移和侵袭.此外,对肝癌细胞和正常肝组织的基因表达数据进行统计分析,发现YB1表达与ZEB1表达呈正相关,与临床预后显著相关.结论 本研究揭示了YB1通过调节肝癌细胞中miR-205/200b-ZEB1轴促进肿瘤进展的新机制.研究结果还表明,YB1可能通过miRNAs介导的基因调控来发挥其生物学功能,可作为治疗癌症的潜在靶点.