高迁移率族蛋白1对阿霉素诱导的白血病K562细胞凋亡的影响

R73-36+2; 背景与目的:高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)作为核DNA结合蛋白参与稳定染色质结构与功能和基因转录调控.近年研究发现,细胞内外HMGB1与多种肿瘤(例如,乳腺癌、结肠癌、黑素瘤)增殖和转移有密切关系,在多种实体瘤组织和未成熟细胞中表达丰富.本研究的目的是探讨转染HMGB1基因对阿霉素(adriamycin,ADM)诱导的白血病K562细胞凋亡的影响,旨在进一步阐明HMGB1在儿童白血病中的分子作用机制.方法:将HMGB1基因真核表达载体pcDNA3.1-HMGB1转染至K562细胞,构建HMGB1基因高表达的K562细胞.Western blot和RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain raction)法检测基因转染前后K562细胞中HMGB1蛋白及mRNA的表达水平;WST8法检测ADM对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测和计算凋亡细胞百分率;Westem blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达:采用Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3和Caspase-9的活性.结果:与转染空载体的K562细胞相比,转染HMGB1基因的K562细胞HMGB1 mRNA表达水平增加85%,蛋白表达水平增加56%.HMGB1基因过表达降低了K562细胞对ADM的药物敏感性,使ADM的IC50从转染前的(0.06±0.00)p,g/mL增加到(3.46±0.06)μg/mL,并在ADM浓度为1 μg/mL时凋亡细胞百分率下降31%.HMGB1基因过表达抑制了ADM所致K562细胞Bcl-2蛋白表达水平下降.ADM处理细胞12 h和24 h后,转染HMGB1基因的K562细胞的Caspase-3和Caspase-9活化明显受到抑制(1.55±0.06 vs.2.55±0.06,1.86±0.10 vs.2.85±0.06;1.40±0.08 vs.2.03±0.05,1.55±0.06 vs.2.22±0.05,P值均≤0.05).结论:HMGB1高表达可通过调节Bcl-2蛋白水平和Caspase3及Caspase-9活性来抑制阿霉素诱导的白血病K562细胞凋亡.