siRNA沉默多效生长因子表达及其生物学意义

背景与目的：多效生长因子（pleiotrophin，Ptn）基因是一种分泌性的生长因子．具有促进肿瘤细胞的增殖与迁移及肿瘤血管的生成等功能。有研究表明，抑制该基因的表达．就能够有效地控制肿瘤细胞的过度增殖，从而达到抑制肿瘤发生与发展的目的。本研究旨在合成一种能够有效抑制该基因表达的小干扰RNA。方法：（1）设计并合成具有基因特异性的一组寡核苷酸片段，并克隆到pSilencer^TM3．1-H1 hygm载体；（2）瞬时转染siRNA表达载体至3T3细胞，以检测不同siRNA对Ptn基因表达的抑制能力；（3）用脂质体Lipofectamine 2000转染和潮霉素筛选等方法建立能稳定表达相应PtnsiRNAs的一组FIEN-/-MEF241细胞株．并对其Ptn的表达水平进行检测；（4）利用细胞生长曲线检测沉默Ptn基因对PTEN-/-MEF241细胞生长的影响：（5）裸鼠成瘤实验观察Ptn基因沉默后，PTEN-/-MEF241细胞致瘤特性的改变。结果：设计并合成了3条针对Ptn基因的siRNAs，并证实其中的1条小干扰RNA，即Ptn siRNA-B能显著地抑制PTEN-/-MEF241细胞中Ptn基因的表达．抑制效率达到95％以上；同时能使FIEN-/-MEF241的生长速度明显减慢；接种裸鼠后成瘤率仅为1／8，而对照组的成瘤率为5／8，发生肿瘤的潜伏期超过90天．而对照组为30天左右，可见裸鼠成瘤率被显著抑制，发生肿瘤的潜伏期大大延长。结论：本研究设计并合成的针对Ptn基因的小干扰RNA，即PtnsiRNA—B能够抑制PTEN-/-MEF241细胞增殖，降低PTEN-/-MEF241细胞的致瘤性，因此可能成为一种新型的肿瘤基因治疗药物。