细胞周期检测点的流式细胞术分析

背景与目的：真核细胞的细胞周期运行遵循着严格的时相次序，这种精密的延缓和强制的次序，由细胞监控机制——检测点来完成，检测点功能的丧失会导致肿瘤的发生。传统的细胞周期检测点分析多数基于群体细胞DNA直方图的流式细胞术。本研究以晚G1期检测点为模式，建立一种新的细胞周期检测点分析方法——Cyclins／DNA双参数流式细胞术，并评价应用该方法进行细胞周期检测点分析的可行性和优越性。方法：将紫外线照射诱导后的人类急性淋巴细胞型白血病细胞株（MOLT-4）于不同时间点收获固定，分两组进行流式细胞仪检测：一组用DNA直方图法，Modifit软件分析计算G0／G1期细胞总数；另一组应用Cyclin E／DNA双参数流式细胞术对G1晚期细胞CyclinE的荧光强度、阈值及G0／G1各亚期细胞数量进行定量分析，并比较两组实验结果。结果：用DNA直方图法观察到紫外线照射后0～4h G0／G1期细胞总数基本不变（5300～5500），6h后开始上升（6241，12．6％）。而用CyclinE／DNA双参数法观察到：（1）G1晚期细胞的CyclinE荧光强度于照射后短时间内便开始变化，1h上升为341．2（对照295．1，15．6％），6h上升为577．6（95．7％），此时CyclinE阈值上升到5．4（0h为2．0）；（2）G0／G1各亚期细胞数目变化趋势不明显：G1晚期细胞数6h时略为减少（此时凋亡率为5．61％），G1早期细胞数缓慢上升。结论：CyclinE／DNA双参数流式细胞术将Cyclin E的荧光强度及表达阈值定量化，对于细胞晚G1期检测点的检测比传统的DNA直方图法更为敏感和精确。