利用报道基因检测鼻咽癌细胞的RNA干扰作用

背景与目的：RNA干扰(RNA interference，RNAi)具有高效特异阻断基因表达的特点，在基因功能研究、信号转导通路的研究以及基因治疗中得到很广泛的应用。本实验通过体外转录合成siRNA和构建表达shRNA的质粒载体两种方法，检测鼻咽癌细胞系的RNAi作用，建立一个较完善的RNAi技术平台。方法：体外转录合成或通过pSUPER．retro构建表达针对GFP和荧光素酶的siRNAs或shRNAs，将它们和报道基因一起瞬时转染HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞．用荧光显微镜和Western blot检测GFP表达情况：用荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性。结果：3′末端带UU突出的siGFP2和psGFP能特异性地抑制细胞中GFP的表达，而单链反义RNA和3′末端不带UU突出的siGFP1无此作用。定量荧光素酶活性分析发现，siLuc能抑制HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞中荧光素酶的表达，其抑制率分别达到91.43％，78．01％，90．30％和62．85％。HeLa细胞瞬时转染psLuc后，荧光素酶的表达抑制率可达到78．22％。结论：体外转录合成的siRNA和表达shRNA的质粒均能诱发RNAi效应。3′UU突出末端在siRNA诱发的RNAi中起作用。鼻咽癌细胞与HeLa细胞一样存在RNAi效应。