血管内皮生长因子2型受体胞外1～3区核酸疫苗的构建及对H22肿瘤生长的抑制作用

R735.7; 背景与目的:大多数实体肿瘤的生长转移都需要新生血管的支持,血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的血管生成中居中心地位,而 flk1(fetal liver kinase 1)是 VEGF发挥作用的关键.阻断 VEGF同 flk1的结合可望达到抑制肿瘤生长的目的.我们构建了小鼠 flk1胞外 1～ 3区核酸疫苗,并检验疫苗对肝癌细胞 H22小鼠移植瘤生长的抑制作用.方法: RT-PCR法克隆 flk1胞外 1～ 3区基因片段,将片段插入质粒 pcDNA3.1(+ ),构建核酸疫苗 pcDNA3.1(+ ) flk1-Domain1-3;脂质体转染 COS7细胞, Western blot法检测 flk1-Domain1-3的真核表达;采用标准 4 h 51Cr释放实验检验疫苗免疫小鼠特异性 CTL. 30只小鼠分为疫苗接种组 ,pcDNA3.1(+ )接种组和生理盐水接种组.股四头肌肌肉丰厚处接种 10天后再皮下接种 H22细胞,记录肿瘤的生长情况、体积、湿重、微血管密度、小鼠死亡时间,观察疫苗对小鼠 H22皮下移植瘤生长的抑制作用.结果: PCR扩增出 1 252 bp大小的基因片段,测序证明所获基因序列阅读框架与 GenBank所公布的 flk1胞外 1～ 3区一致. Western blot显示转染疫苗的细胞中有分子量约为 44 kDa的蛋白表达,与 flk1胞外 1～ 3区蛋白大小一致; 51Cr释放实验提示 ,疫苗可引起针对内皮细胞的特异性 CTL反应.疫苗对肿瘤的预防作用实验发现,肿瘤出现时间疫苗组为( 5.2± 0.9)天,空质粒组为( 4.0± 0.7)天,生理盐水组为( 3.8± 0.6)天;小鼠生存时间疫苗组为( 24.5± 3.2)天,空质粒组为( 14.7± 2.6)天,生理盐水组为( 14.3± 2.0)天;微血管密度疫苗组为 10.1± 1.7,空质粒组为 27.3± 3.3,生理盐水组为 25.3± 4.6;肿瘤湿重疫苗组为( 1.4± 0.1) g,空质粒组为( 1.8± 0.2) g,生理盐水组为( 1.8± 0.2) g;疫苗组各项指标与空质粒组和生理盐水组比较差异具有显著性( P< 0.05);空质粒组和生理盐水组各项指标比较差异无显著性( P >0.05).结论: pcDNA3.1(+ )-