慢病毒携带的双自杀基因对淋巴瘤细胞杀伤作用的实验研究

背景与目的：慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点，适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法：将表达慢病毒的3种质粒，即包装结构基因质粒pCMV△8．2、包膜基因质粒pCMV．VSVG、目的基因质粒pHR′CS．GFP或pHR′CS．CDglytk分两组(pHR′CS．Cdglytk为实验组、pHR′CS．GFP为对照组)，经脂质体导入病毒包装细胞293T，包装成病毒后，收集病毒上清，浓缩后转染Raji细胞，用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和／或无环鸟苷(GCV)，用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率，检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果：表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光，透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51％、50％，与未转染组Raji细胞比较，差异有显著性(P