赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA的克隆及其表达的组织特异性

Q95; 以赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)脑垂体中提取的RNA为模板,根据芳香化酶的保守序列设计引物,利用GeneRacerTM技术,克隆出两种芳香化酶即脑芳香化酶(P450aromB)和性腺芳香化酶(P450aromA)的cDNA,其全长分别为1 901 bp(编码509 aa)和1 833 bp(编码518 aa).序列分析结果表明,赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA序列的同源性为51.6%,氨基酸序列之间同源性为62.5%,与斜带石斑鱼两种芳香化酶氨基酸同源性分别为94.7%和97.9%.对8个科的10种鱼进行了分子系统进化树分析,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致.以特异性引物扩增雌、雄赤点石斑鱼各种组织(垂体、嗅球、端脑、下丘脑、中脑、后脑、延脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、性腺、鳃、胃、肠、皮肤、脂肪、肌肉、头肾、胸腺、鳔),以β-actin作内标比较各组织芳香化酶基因表达量的差异,结果表明,赤点石斑鱼脑芳香化酶(P450aromB)有广泛的组织分布,脑和垂体的表达量很高,各组织表达量有明显的雌、雄差异;而性腺芳香化酶(P450aromA)表达主要集中于垂体和性腺,且不论雌雄,其性腺表达量均高于脑垂体,和P450aromB的表达模式明显不同,表现为在脑部,P450aromB表达量高于P450aromA,而在性腺,P450aromA表达量高于P450aromB,两种芳香化酶在脑垂体和性腺出现重叠表达[动物学报50(5):791 799,2004].