不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层多孔支架的影响

R783.1; 目 的:探讨不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层(decellularized small intestinal submucosa,SIS)多孔支架理化性能及生物相容性的影响.方法:(1)将新鲜SIS塑形为三维多孔支架并采用戊二醛(glutaraldehyde,GA)、碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC]和原花青素(procyanidine,PA)3 种交联剂进行交联,获得3组交联后支架,分别为GA组、EDC组和PA组.(2)理化性能评价:对3组多孔支架进行宏观形貌观察,使用场发射环境扫描电镜进行微观形貌观察并测定孔径及孔隙率,使用茚三酮法测定交联度,使用酶促降解法评价抗降解性能,使用万能力学测试机测定应力应变曲线及压缩强度.(3)生物相容性评价:使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测交联处理对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)增殖的影响,使用Calcein-AM/PI活死细胞染色法评价交联处理后支架的细胞毒性.结 果:宏观形貌观察可见交联修饰未破坏支架三维结构;微观形貌观察可见各组多孔支架具有大小均匀、相互连通的孔隙结构.EDC组孔径最大,与另两组差异具有统计学意义(P＜0.05);PA组孔隙率最低,与另两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).PA组交联度最高而溶胀率最低,EDC组溶胀率最高.EDC组和GA组的体外降解速率均高于PA组,其中GA组降解速度最快,PA组抗降解能力最佳,降解至第15天时3组质量丧失率间的差异有统计学意义(P＜0.05).EDC组和GA组压缩强度近似,PA组压缩强度最高,与另两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).GA组支架的细胞毒性最大,hBMSCs在EDC组和PA组支架上具有更好的增殖能力,在GA组增殖较慢.结论:3种交联剂处理均可达到较高的交联度,经EDC和PA交联处理的SIS多孔支架在拥有较好理化性能的同时具有良好的生物相容性,相比于GA是更有应用前景的交联处理方法.