Desarrollo de embriones de conejo sobre matriz oviductal y medio condicionado por células oviductales. Efectos sobre la viabilidad y el crecimiento postnatal

[ES] Los embriones producidos in vitro alteran su desarrollo con repercusiones en su fisiología que pueden comprometer su viabilidad inmediata o introducir cambios que serán observables durante su etapa postnatal. Estas alteraciones son el resultado del proceso adaptativo que los embriones desencadenan para hacer frente al ambiente y composición de los medios de cultivo. El objetivo del estudio es evaluar nuevos sistemas de cultivo para embriones de conejo en estadio de 2 células que ayuden a paliar los efectos adversos del cultivo. Para ello se estudió, en un primer experimento, un sistema de co-cultivo basado en la reconstrucción de un epitelio oviductal homólogo sobre dos tipos de hidrogeles (colágeno tipo I y matriz oviductal de 24h) y dos medios de cultivo (medio base que contaba con piruvato y lactato sódico y un segundo medio que fue suplementado adicionalmente con EGF e ITS). En el segundo experimento, se utilizó el medio base condicionado con el cultivo previo de dos tipos de epitelio oviductal que diferían en la edad desde que se indujo la ovulación (48h y 72h). En ambos experimentos los embriones se obtuvieron de conejas donantes 24 horas después de su inseminación (IA) e inducción de la ovulación con acetato de buserelina. Las conejas donantes habían sido tratadas 72h previas a la IA con coriofolitropina alfa para incrementar su respuesta ovulatoria. Las condiciones y periodo de cultivo fueron iguales en ambos experimentos, 38.0ºC, 5% CO2, humedad a saturación y 72h de cultivo. Al finalizar el cultivo se catalogó el estadio de desarrollo alcanzado por los embriones. En el primer experimento, los embriones fueron transferidos a conejas receptoras inducidas a ovular 60 horas antes en grupos de entre 15 y 20 embriones en cada hembra. Además, se prepararon dos grupos control de conejas, uno de ellos por IA con el fin de evaluar el impacto del cultivo y transferencia en el crecimiento postnatal y otro con conejas transferidas con embriones en estadio de mórula no cultivados con el fin de observar el efecto del cultivo sobre la supervivencia y el crecimiento postnatal. En el segundo bloque experimental, en el que se estudiaron los medios condicionados con los epitelios oviductales de 48h y 72h, se evaluó además del desarrollo in vitro, la expresión de los genes de pluripotencialidad (OCT4 y SOX2) como parámetros de calidad embrionaria. El cultivo embrionario en los medios condicionados produjo un retraso en el desarrollo embrionario temprano, así com