Partial purification of hen egg white lysozyme by ethanol precipitation method and determination of the thermal stability of its lyophilized form

Özet: Bu araştırmada yumurta akında bulunan safsızlık oluşturan başlıca proteinlerin etanolle farklı süreler inkübe edilerek çöktürülmesi yöntemiyle lisozimin kısmi saflaştırılması ve ısıl stabilitesinin incelenmesi çalışılmıştır. Lisozimin kısmi saflaştırmasında seyreltilmiş yumurta akının 2-8 saat % 20 etanolle inkübe edilmesi etkinliği düşük bir işlemdir. Ancak, seyreltilmiş yumurta akının % 30 etanolle 4-6 saat, % 40 etanolle 6-8 saat inkübe edilmesi saflaştırma açısından daha başarılıdır. İnkübasyon uygulanmadan en yüksek saflık % 40 etanol kullanılarak elde edilmiş ve bu etanol konsantrasyonu sürekli yöntemle lisozim saflaştırılmasına ve üretimine uygun bulunmuştur. Kesikli yöntemle, inkübasyon uygulanarak lisozim saflaştırılması ve üretimi içinse en uygun etanol konsantrasyonu % 30 olarak belirlenmiştir. % 20, % 30 ve % 40 etanolle 6 saat inkübasyonla çökeltme, diyaliz ve liyofilizasyonla elde edilmiş lisozim örneklerinin aktiviteleri sırasıyla 1878, 6669 ve 6115 U/mg toz, protein miktarları ise sırasıyla 0.98, 0.90 ve 0.93 mg protein/mg toz düzeyindedir. Liyofilize enzimin ısıl inaktivasyon parametrelerinden D (D o = 29.2-59 dak 80 C ve D o = 8.8-21 dak) ve z değerleri (z . . = 17.4-22.3 °C), lisozimin farklı yumurta partilerindeki ısıl direncinin beklenenin 90 C 80 90 c altında ve değişken olduğunu göstermiştir. Abstract: Lysozyme was partially purified from hen egg white by precipitation of non-lysozyme protein impurities during incubation in the presence of ethanol. The thermal stability of the obtained partially purified enzyme was also characterized. The incubation of diluted egg white for 2-8 h in the presence of 20% ethanol was not very effective for the partial purification of lysozyme by precipitation of major egg white proteins; however, 4- to 6-h or 6- to 8-h incubation of diluted egg white in the presence of 30% and 40% ethanol could be employed more effectively for partial purification of lysozyme. Without applying the incubation period, the highest specific activity was obtained by the treatment of egg white with 40% ethanol. Thus, ethanol at this concentration could be used for a continuous process of partial purification. For batch lysozyme purification, on the other hand, incubation in the presence of 30% ethanol was more appropriate. The activities and protein contents of dialyzed and lyophilized enzymes obtained by 6 h-incubation in the presence of 20%, 30%, and 40% ethanol precipitations were 1878, 6669, and 6115 U/mg powder, an