Assay of Mycobacterium tuberculosis in biopsy specimens taken from hepatic granuloma patients using polymerase chain reaction method

Amaç: Karaciğer tüberkülozunun teşhisinde klasik laboratuvar yöntemlerinin (kültür ve direkt boyama ile aside rezistan basil aranması) duyarlılığı sınırlıdır. Tanı sıklıkla klinik ve histolojik bulgularla konur ve tedaviye alınan cevap ile teyit edilir. Tüberküloz basilini saptamaya yönelik "Polymerase Chain Reaction" (PCR), son yıllarda pulmoner ve ekstrapulmoner tüberküloz tanısında kullanılan ve bazılarınca oldukça güvenilir ve duyarlı bir yöntem olduğu belirtilen bir testtir. Ancak, PCR'ın karaciğer tüberkülozunun teşhisinde kullanımına dair yeterli klinik araştırma mevcut değildir. Yöntem: Bu çalışmada; hepatik granülomalı (granülomatöz hepatitli) hastaların formalin ile fikse edilmiş, parafine gömülü doku örneklerinde M.tuberculosis basilinin gösterilmesi ve bu yöntemin duyarlılığının tespiti amaçlandı. Granülomatöz hepatit tanısı konmuş hastalara ait, formalin ile fikse edilmiş, parafin bloklu 32 karaciğer biyopsi örneği çalışıldı. Örnekler klinik ve laboratuvar bulguları ile hepatik granülomanın histopatolojik tanısı ve tedaviye alınan cevap gözönüne alınarak; Grup A (n=12) kazeifikasyon nekrozlu hepatik granüloma (karaciğer TB), Grup B (n=10) non-kazeöz hepatik granüloma (karaciğer TB), Grup C (n=10) TB dışı hepatik granüloma hastaları olmak üzere üç grupta değerlendirildi. Bu hastaların biyopsi materyelinde; Ziehl Neelsen ve modifiye allocrom boyamaları ile direkt basil arandı ve PCR incelemesi yapıldı. DNA amplifikasyonu, "first step PCR" ve "nested PCR" yöntemleri ile M.tuberculosis IS6110 geni kullanılarak yapıldı. Bulgular: Direkt boyama tüm örneklerde negatif kaldı. M.tuberculosis gen amplifikasyonu; "first step PCR" ile Grup A' da 3/12 (%25) hastada, "nested PCR" ile Grup A' da 4/12 (%33), Grup B' de 3/10 (%30) ve Grup C' de 1/10 (%10) hastada pozitif bulundu. Grup A ve B'de bulunan ve tüberküloza bağlı granülomatöz hepatit tanısı almış toplam 22 hastanın sadece 7'sinde (%32) PCR pozitifliği elde edildi. Buna karşılık kontrol grubunda sadece bir hastada (%10) PCR testi pozitif idi. Sonuç: Bu çalışmanın bulguları, en azından bu hasta grubunda, tüberküloz tanısı için PCR testinin yeterince duyarlı olmadığını göstermektedir. Düşük duyarlılığın olası sebepleri olarak; örneklerdeki DNA konsantrasyonunun azlığı, parafin bloklardaki inhibitörler ve kullanılan primerlerin uygun olmaması gibi faktörler ileri sürülebilir. Background/aims: In the diagnosis of hepatic tuberculosis, classical laboratory methods (including cultures and direct staining of