Determination of optimal dose of EGF for bovine oocyte maturation and subsequent in vitro fertilization and culture in two media

Bu çalışmanın amacı, sığır oositlerinin in vitro maturasyonunda EGF'nin en uygun dozunun saptanması ve EGF ile mature edilen oositlerin farklı IVF ve IVC vasatlarında inkübe edildikten sonra kültür vasatlarının embryo gelişimi üzerine etkilerinin araştırılmasıdır. Bu çalışmada mezbahadan elde edilen sığır oositleri rastgele seçilerek 4 gruba ayrıldı. Her bir gruptaki oositler EGF'nin optimum dozunu belirlemek amacıyla EGF'nin farklı dozlarında 24 saat süreyle inkübe edildi (Kontrol: 0 ng/mL, Grup 1: 1 ng/mL, Grup 2: 10 ng/mL ve Grup 3: 100 ng/mL). İnkübasyon sonrası mature olan oositler dondurulmuş boğa sperması ile swim up metodu kullanılarak fertilize edildi. Dört gruptaki fertil oositler ikiye ayrılarak yarısı CR1aa ve diğer yarısı G1.3/G2.3 vasatlarında kültüre edildi. Kültür sonrası embriyolar bölünme (48. saat), 3. günde 5-8 hücreli embriyo ve fertilizasyon sonrası 8. günde blastosist aşamaları açısından incelendi. Maturasyon kriterleri olan kumulus ekspansiyonu ve nükleer maturasyon oranları Grup 1, Grup 2 ve Grup 3'de kontrol grubuna oranla yüksek bulundu (P < 0,01). Ancak farklı EGF dozlarında oosit maturasyonu açısından fark olmadığı tespit edildi. Bölünme oranları, kontrol grubuna göre EGF eklenen gruplarda önemli ölçüde yüksek bulundu (P < 0,01). Blastosist gelişimi açısından, CR1aa ve G1.3/G2.3 kültür vasatlarında inkübe edilen embryolar arasında önemli farklılık saptanmadı (P > 0.1). The aim of this study was to determine the optimal dose of EGF on in vitro maturation of bovine oocytes and to investigate the effect of different IVF and IVC media on development of bovine embryos matured with EGF. Oocytes collected from a slaughterhouse were randomly divided into 4 groups. Each group of oocytes was incubated with different doses of EGF (Control: 0 ng/mL, Group 1: 1 ng/mL, Group 2: 10 ng/mL, and Group 3: 100 ng/mL) for 24 h to determine the optimal dose. Matured oocytes were fertilized with frozen-thawed bull sperm by using the swim-up method. The oocytes in each group were divided into 2 subgroups and cultured in CR1aa or G1.3/G2.3 media. Embryos were evaluated for cleavage (48th h), and 5-8 cell embryo (day 3) and blastocyst development (day 8) after fertilization. The rates of cumulus expansion and nuclear maturation were higher (P < 0.01) in GI, GII, and GIII compared to the control group. However, no significant difference was observed on oocyte maturation rates between different doses of EGF. Cleavage rates were higher (P <